En este vídeo-tutorial mostramos paso a paso cómo ejecutar la técnica conocida como electroforesis en gel de agarosa o electroforesis capilar en gel.

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas, entre las cuales se encuentran los ácidos nucleicos (DNA y RNA), según la movilidad de éstas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica. Las proteínas pueden tener carga neta positiva o negativa, los ácidos nucleicos tienen carga negativa debido a sus grupos fosfato.

Fases de la electroforesis en gel de agarosa:

1. Obtención de las muestras de ADN
2. Preparación de la agarosa
3. Preparación de las muestras con el buffer de electroforesis
4. Carga de la muestras
5. Cierre de la cubeta de muestras
6. Conexión de la fuente de alimentación (se inicia la electroforesis)
7. Observar en el transiluminador UV

Equipo necesario para la técnica de electroforesis en gel:

• Cubeta de electroforesis (ver modelo de 100×70 mm o modelo de 100×78 mm)
• Fuente de alimentación (ver)
• Transiluminador UV (ver)
• Pipetas automáticas y microtubos: (ver)

Reactivos y Buffers

• Agarosa (CAS N° 9012-36-6)
• Tris base (2-amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, CAS N° 77-86-1)
• Ácido acético glacial (CAS N° 64-19-7)
• EDTA (ácido etilendiaminotetraacético, CAS N° 60-00-4)
• Ácido bórico (CAS N° 10043-35-3)
• NaOH (hidróxido de sodio, CAS N° 1310-73-2)
• Sacarosa (CAS N° 57-50-1)
• Glicerol (CAS N° 56-81-5)
• Azul de bromofenol (CAS N° 115-39-9)
• Xileno cianol (CAS N° 2650-17-1)
• Bromuro de etidio (CAS N° 1239-45-8)

• Buffer TAE (Tris – Acetato- EDTA) (1L): Tris base, 242 g; ácido acético glacial, 57.1 ml; 0.5 M EDTA pH 8, 100 ml. Ajustar hasta 1 litro con agua destilada o desionizada
• Buffer TBE (Tris Borato EDTA) (1L): Tris base, 54 g; ácido bórico, 27.5 g; 0.5 M EDTA pH 8, 20 ml. Ajustar hasta 1 litro con agua destilada o desionizada
• Buffer de carga tipo I (6x): 0.25% azul de bromofenol; 0.25% xileno cianol; 40% sacarosa, en agua. Almacenar a 4°C.
• Buffer de carga tipo II (6x): 0.25% azul de bromofenol; 0.25% xileno cianol; 30% glicerol, en agua. Almacenar a 4°C.

• Agente colorante fluorescente: Bromuro de etidio (BrEt). Se prepara a una concentración de 10 mg/ml en agua, y se conserva a temperatura ambiente o a 4°C. Se puede preparar el gel ya con el BrEt incorporado, o teñir el gel una vez finalizada la electroforesis.

Video-tutorial: