Tutorial en vídeo para electroforesis en gel

En este vídeo tutorial mostramos paso a paso cómo realizar una electroforesis en gel de agarosa, una de las técnicas más utilizadas para separar ácidos nucleicos (ADN y ARN) según su tamaño y carga eléctrica.

La electroforesis es una técnica de laboratorio empleada para separar moléculas mediante la aplicación de un campo eléctrico sobre una matriz porosa. En biología molecular se utiliza principalmente para la separación de ácidos nucleicos (ADN y ARN), aunque también puede aplicarse al análisis de proteínas. Mientras que los ácidos nucleicos presentan carga negativa debido a sus grupos fosfato, las proteínas pueden presentar carga neta positiva o negativa en función de sus características.

Fases de la electroforesis en gel de agarosa

1. Obtención de las muestras de ADN.
2. Preparación del gel de agarosa.
3. Preparación de las muestras con el buffer de electroforesis.
4. Carga de las muestras en el gel.
5. Cierre de la cubeta de electroforesis.
6. Conexión de la fuente de alimentación para iniciar la electroforesis.
7. Visualización de las bandas mediante un transiluminador UV.

Material necesario para realizar una electroforesis en gel

• Cubeta de electroforesis (ver modelo de 100 × 70 mm o modelo de 100 × 78 mm).
• Fuente de alimentación para electroforesis (ver modelo).
• Transiluminador UV (ver modelo).
• Pipetas automáticas y microtubos (ver productos).

Reactivos necesarios

• Agarosa (CAS Nº 9012-36-6).
• Tris base (2-amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, CAS Nº 77-86-1).
• Ácido acético glacial (CAS Nº 64-19-7).
• EDTA (ácido etilendiaminotetraacético, CAS Nº 60-00-4).
• Ácido bórico (CAS Nº 10043-35-3).
• Hidróxido de sodio (NaOH, CAS Nº 1310-73-2).
• Sacarosa (CAS Nº 57-50-1).
• Glicerol (CAS Nº 56-81-5).
• Azul de bromofenol (CAS Nº 115-39-9).
• Xileno cianol (CAS Nº 2650-17-1).
• Bromuro de etidio (CAS Nº 1239-45-8).

Preparación de buffers

• Buffer TAE (1 L): Tris base, 242 g; ácido acético glacial, 57,1 ml; EDTA 0,5 M (pH 8), 100 ml. Completar hasta 1 litro con agua destilada o desionizada.
• Buffer TBE (1 L): Tris base, 54 g; ácido bórico, 27,5 g; EDTA 0,5 M (pH 8), 20 ml. Completar hasta 1 litro con agua destilada o desionizada.
• Buffer de carga tipo I (6×): 0,25 % azul de bromofenol; 0,25 % xileno cianol; 40 % sacarosa en agua. Conservar a 4 °C.
• Buffer de carga tipo II (6×): 0,25 % azul de bromofenol; 0,25 % xileno cianol; 30 % glicerol en agua. Conservar a 4 °C.

Agente colorante

El bromuro de etidio (BrEt) es un agente fluorescente utilizado para visualizar los ácidos nucleicos tras la electroforesis. Se prepara habitualmente a una concentración de 10 mg/ml en agua y puede conservarse a temperatura ambiente o a 4 °C. Puede incorporarse directamente al gel o emplearse para teñirlo una vez finalizada la electroforesis.

Vídeo tutorial de electroforesis en gel